上海光學(xué)儀器一廠講訴共軛焦顯微鏡操作步驟和方法！
上海光學(xué)儀器一廠：
實(shí)驗(yàn)流程：
*.開(kāi)冷氣，開(kāi)風(fēng)扇，開(kāi)冷卻器。
1.將汞燈打開(kāi)，將顯微鏡總燈源打開(kāi)。
2.打開(kāi)scanner，打開(kāi)電腦電源。
3.開(kāi)啟Ar雷射風(fēng)扇，開(kāi)啟雷射，He-Ne雷射旋鈕右扳至start即可，Ar雷射開(kāi)啟方式，要將旋鈕轉(zhuǎn)到3點(diǎn)鍾方向，再轉(zhuǎn)回start，而亮燈開(kāi)啟表示開(kāi)啟成功。再調(diào)整Ar雷射強(qiáng)度，轉(zhuǎn)至12點(diǎn)鍾，不要調(diào)整到max，會(huì)使螢光很容易被分解。
4.啟動(dòng)軟體。
5.將樣品放好，滴上油，調(diào)整鏡頭，63/1.32/oil。
6.觀察樣品應(yīng)注意事項(xiàng)：A.將光路控制桿推入VIS位置。B.將螢光濾鏡調(diào)控至1or2or3的位置。(1:UV燈，2.FITC螢光濾鏡，3.rhodamine螢光濾鏡)。C.將tube lens轉(zhuǎn)到1.0X的位置。D.打開(kāi)UV燈，推下桿鈕(0的位置)。
7.先以快速上升鈕，調(diào)控上升載物臺(tái)，再將接近物鏡時(shí)，就小心緩慢的調(diào)整上升鈕，會(huì)發(fā)現(xiàn)綠光會(huì)漸漸變暗，等綠光突然變亮，表示鏡頭已經(jīng)接觸到油滴，此時(shí)改轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)輪�？焖俚爻约旱姆聪蜣D(zhuǎn)動(dòng)，轉(zhuǎn)動(dòng)后視野紅色會(huì)變亮在變暗，此時(shí)表快接近目標(biāo)，在繼續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)看到目標(biāo)為止。(尋找時(shí)利用FITC綠色燈激發(fā)，于目鏡中看到紅色的光。利用FITC尋找較快)�？吹胶笳{(diào)整視野，至較佳的狀況。
8.將顯微鏡視野轉(zhuǎn)至電腦，須注意事項(xiàng)：A: 將光路控制桿拉出。B.將螢光濾鏡調(diào)控至4的位置。(4:電腦)。C.將tube lens轉(zhuǎn)到UV scan的位置。D.關(guān)上UV燈，推上桿鈕(1的位置)。
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9.操作軟體：
10.選用螢光感測(cè)光譜測(cè)定，在acquire中，按Beams，光線激發(fā)光(U-FITC-TRITC-1)選取好，按兩下。大多使用user定的，不要去改leica內(nèi)定的質(zhì)，如果要自行設(shè)定條件及一各專屬的應(yīng)用檔名，則按save，輸入檔名即可。選取設(shè)定的PMT，選取Glow(O):訊號(hào)感測(cè)超過(guò)閥值，會(huì)警示與變藍(lán)色，其馀為灰階設(shè)定。
11.設(shè)定和確定基本掃描參數(shù)[obj]>物鏡的倍數(shù)：PL-APO 63x/1.32/oil，[mode]>掃描模式：xyz，[format]>選512*512，[speed]>掃描速度：400Hz，[pinh]>選Airy1，[zoom]選取1，[8/12]選取8 bits。
12.完成上列基本設(shè)定后，即可開(kāi)始執(zhí)行連續(xù)掃描continuous scan，掃描后快速調(diào)整PMT感測(cè)的gain，以出現(xiàn)一點(diǎn)點(diǎn)藍(lán)色為佳，也可以調(diào)整Z軸，調(diào)整焦距，讓影像更清晰，完按stop。
*.除了PMT及Z-focus調(diào)整外，也可以調(diào)整雷射強(qiáng)度，光譜感測(cè)范圍，或pinhole大小，或改變PMT的offset，調(diào)整后，可再按一次continuous scan，及可以儲(chǔ)存影像。如果影像不夠清晰或雜訊太多，則可以在使用average的擷取處理。
13.影像儲(chǔ)存：將游標(biāo)至于影像中，按右鍵，選sent to>experiment> >影像儲(chǔ)存。再至?xí)捍鎱^(qū)，選取檔案，至file指令中，選取save as。
14.影像average處理：調(diào)大 和 的值，2*2或4*4，值越大，越清晰。在按 ，掃完按stop，掃完在影像中按滑鼠右鍵，儲(chǔ)存。
15.在影像調(diào)控顯示視窗中，可以選取顯示視窗，如果為ch-3，視窗為(FITC/TRITC/Cy5)，第四個(gè)ch顯示區(qū)為3各視區(qū)的overlay。視窗顏色可以選取旁邊的調(diào)色帶，來(lái)更改顏色。
16.連續(xù)掃描：調(diào)整 *1， *1，按 ，調(diào)整Z軸，按 ，調(diào)整Z軸，按 。按 看厚度，按 選取切片次數(shù)(1.2μm/次)。關(guān)掉 ，調(diào)整 *2， *2，按 。掃完影像后，可以以play連續(xù)觀看，或 觀看所有影像，或以 選取較好的影像，也可以用旁邊的調(diào)色帶調(diào)整影像，完成后，在影像中按滑鼠右鍵，儲(chǔ)存。儲(chǔ)存完后選取再按file儲(chǔ)存。（上海光學(xué)儀器一廠講訴共軛焦顯微鏡操作步驟和方法！本站網(wǎng)址http://m.ddzylvj.cn/ 注明）
17.關(guān)機(jī)：調(diào)整Ar雷射左調(diào)至min較小處。關(guān)閉He-Ne雷射，關(guān)閉Ar雷射至off。關(guān)閉掃描器電源，結(jié)束軟體，關(guān)閉電腦電源，Ar雷射電扇不要關(guān)，關(guān)掉顯微鏡燈源(汞燈，鹵素?zé)?，關(guān)閉顯微鏡總電源開(kāi)關(guān)，擦鏡頭，將鏡頭轉(zhuǎn)至空鏡頭，關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室總電源。
